La Placa de Neubauer es una herramienta esencial para el análisis microbiológico, diseñada específicamente para el conteo preciso de células en suspensiones. Su uso es crucial en laboratorios de biología, medicina, y biotecnología, donde se requiere una cuantificación exacta de células como glóbulos rojos, blancos, y microorganismos. Esta placa es un portaobjetos de vidrio con una cuadrícula grabada que permite realizar conteos en un volumen definido de líquido, proporcionando una base sólida para cálculos cuantitativos.
Descripción de la Placa de Neubauer Estándar
La Placa de Neubauer estándar está dividida en una cuadrícula de nueve cuadrados grandes, cada uno con un área de 1 mm². Los cuadrados centrales están subdivididos en 25 cuadrados más pequeños, y estos, a su vez, pueden estar subdivididos en áreas aún más pequeñas, dependiendo del nivel de detalle requerido. Cada cuadrado grande tiene un volumen específico, generalmente 0.1 mm³, lo que permite extrapolar el conteo de células en un volumen conocido para determinar la concentración celular en una muestra.
Ilustración medidas Placa de Neubauer
Cómo Usar una Placa de Neubauer
Siguiendo estos pasos detallados, podrás realizar un conteo celular preciso y calcular la concentración de células en tu muestra con la placa de Neubauer.
- Preparación de la Muestra
- Mezcla la muestra con un diluyente adecuado (El diluyente puede variar según el tipo de célula que se esté contando y el propósito del experimento) para asegurar una distribución uniforme de las células.
- Homogeneiza la muestra antes de cargarla en la placa.
- Carga de la Placa
- Aplica una gota de la muestra a la Placa de Neubauer, asegurándote de llenar la cámara sin formar burbujas.
- Cubre la muestra con un cubreobjetos, asegurándote de que esté en contacto con la placa de manera uniforme.
- Conteo Celular: Una vez que hayas colocado la muestra diluida en la placa de Neubauer, es momento de realizar el conteo. La cuadrícula central de la placa de Neubauer está dividida en 9 cuadrados grandes, cada uno de los cuales contiene 16 cuadrados más pequeños. Para el conteo de células, sigue estos pasos:
- Selecciona los Cuadrados para el Conteo: En general, se cuentan las células en 4 de los 16 cuadrados pequeños dentro de un cuadrado grande. Si deseas mayor precisión, puedes contar más cuadrados pequeños o incluso todos los cuadrados grandes.
- Realiza el Conteo: Usa un microscopio con un aumento adecuado (generalmente 100x o 400x) para visualizar las células. Cuenta las células que se encuentran dentro de los cuadrados seleccionados. Es importante aplicar reglas consistentes para incluir o excluir células que tocan los bordes de los cuadrados. La regla más común es contar las células que tocan las líneas superior y derecha del cuadrado y excluir las que tocan las líneas inferior e izquierda. Si las células están agrupadas, es posible que necesites mover la muestra ligeramente para obtener un recuento más representativo.
- Cálculos para Determinar la Concentración Celular: Una vez que hayas contado el número total de células en los cuadrados seleccionados, puedes calcular la concentración de células en la muestra original. Esto se realiza utilizando la fórmula:
El volumen de cada cuadrado pequeño en la placa de Neubauer estándar es de 0.00010.00010.0001 mL (correspondiente a 0,1 * 0,1 * 0,1). Si se utilizan diluciones, es importante multiplicar el resultado por el factor de dilución utilizado, si no es asi, no hace falta multiplicar por el factor de dilución.
Mantenimiento y Limpieza de la Placa de Neubauer
El mantenimiento y limpieza de la Placa de Neubauer son fundamentales para asegurar la precisión de los conteos y prolongar la vida útil del equipo. Después de cada uso:
- Limpieza Inmediata: Lava la placa con agua destilada inmediatamente después de usarla para evitar la acumulación de residuos. Utiliza un detergente suave si es necesario.
- Desinfección: Desinfecta la placa con alcohol isopropílico para eliminar cualquier posible contaminación.
- Secado Cuidadoso: Sécala con un paño suave, evitando dejar residuos o rayar la superficie de la cuadrícula.
- Almacenamiento Seguro: Guarda la Placa de Neubauer en un estuche protector para evitar daños físicos y mantenerla libre de polvo y contaminantes. Un mantenimiento adecuado asegura la precisión en futuras mediciones y prolonga la vida útil de la placa.